Glikolisis adalah jalur sitoplasma yang memecah glukosa menjadi dua senyawa tiga karbon dan menghasilkan energi. Glukosa terperangkap oleh fosforilasi, dengan bantuan enzim hexokinase. Adenosine triphosphate (ATP) digunakan dalam reaksi ini dan produknya, glukosa-6-P, menghambat hexokinase. Glikolisis terjadi dalam 10 langkah, lima di antaranya berada dalam fase persiapan dan lima berada dalam fase pembayaran. Phosphofructokinase adalah enzim pembatas laju. ATP dihasilkan oleh fosforilasi tingkat-substrat oleh senyawa berenergi tinggi, seperti 1,3-bisfosfogliserat dan fosfoenolpiruvat. Tempat terjadinya glikolisis berlangsung dalam sitoplasma dari hampir semua sel tubuh.

Glikolisis digunakan oleh semua sel dalam tubuh untuk menghasilkan energi. Produk akhir glikolisis adalah piruvat dalam pengaturan aerobik dan laktat dalam kondisi anaerob. Pyruvate memasuki siklus Krebs untuk produksi energi lebih lanjut.

Ringkasan reaksi glikolisis adalah sebagai berikut:

C₆H₁₂O₆ + 2ATP + 2NAD⁺ → 2Piruvat + 4ATP + 2NADH

Sedangkan ringkasan reaksi dari glikolisis, siklus asam sitrat dan fosforilasi oksidatif adalah:

C₆H₁₂O₆ + 6O₂ + 2NAD⁺ → 6CO₂ + 6H₂O + Energi