Glukoneogenesis adalah kebalikan dari glikolisis. Glikolisis adalah konversi glukosa menjadi piruvat. Semua langkah glikolisis bersifat reversibel, dan jalur sebaliknya, konversi piruvat menjadi glukosa, disebut glukoneogenesis (dari “glukosa” + neos Yunani, “baru” + genesis Yunani “penciptaan”).

Langkah-langkah berwarna merah (di bawah) mewakili glikolisis. Langkah sebaliknya (berwarna biru) mewakili glukoneogenesis.

Glukosa harus tersedia untuk sel setiap saat, sehingga tubuh memiliki sistem untuk mempertahankan konsentrasi glukosa darah. Ketika kadar glukosa darah turun, simpanan glikogen di hati dikonversi menjadi glukosa. Ketika glikogen habis, tubuh menggunakan glukoneogenesis sebagai sumber energi alternatif. Bahan sumber utama untuk glukoneogenesis adalah pemecahan protein menjadi asam amino. Misalnya, alanin, sistein, glisin, serin, dan treonin semuanya dapat dikonversi menjadi piruvat, sementara aspartat dan asparagin menghasilkan oksaloasetat.