Dalam glikolisis enzim yang terlibat dalam fase persiapan adalah: 1, heksokinase / glukokinase; 2, glukosa fosfat isomerase; 3, fosfofruktokinase-1; 4, aldolase; 5, triosefosfat isomerase. Enzim yang terlibat dalam fase hasil glikolisis adalah: 6, gliseraldehida-3-fosfat dehidrogenase; 7, fosfogliserat kinase; 8, mutase fosfogliserat; 9, enolase; 10, piruvat kinase.

Seperti yang kita kenal, ada dua fase dan sepuluh langkah di jalur glikolitik. Lima langkah pertama dianggap sebagai fase persiapan, karena mereka mengkonsumsi energi untuk mengubah glukosa menjadi dua gula karbon tiga fosfat. Langkah pertama adalah fosforilasi glukosa oleh heksokinase untuk membentuk glukosa-6-fosfat. Reaksi ini mengkonsumsi ATP, tetapi bertindak untuk menjaga konsentrasi glukosa rendah, mendorong pengangkutan glukosa terus menerus ke dalam sel melalui transporter membran plasma.

Selain itu, ia memblokir glukosa agar tidak bocor karena sel kekurangan transporter untuk glukosa-6-fosfat, dan difusi bebas dari sel dicegah karena sifat muatan gula terfosforilasi. Hati juga mengandung glukokinase yang memiliki afinitas yang jauh lebih rendah untuk glukosa, dan berbeda dalam sifat pengaturan. Perbedaan afinitas substrat dan regulasi alternatif enzim ini adalah cerminan peran hati dalam mempertahankan kadar gula darah. Glukosa-6-fosfat kemudian diubah menjadi fruktosa-6-fosfat oleh enzim glukosa fosfat isomerase. Reaksi ini dapat dibalik secara bebas dalam kondisi sel normal tetapi didorong ke depan oleh konsumsi produk fruktosa-6-fosfat selama langkah glikolisis berikutnya.

Dalam kondisi anaerob piruvat dapat dikonversi menjadi laktat oleh laktat dehidrogenase, re-oksidasi NADH menjadi NAD dan memungkinkan glikolisis untuk terus memasok energi. Sumber karbon untuk glukoneogensis dapat berasal dari laktat, asam amino atau gliserol, yang memasuki jalur glukoneogenik di tempat yang berbeda. Jika laktat adalah sumbernya maka pertama-tama dikonversi menjadi piruvat oleh enzim laktat dehidrogenase.